天狼星红染色

天狼星红染色原理：

      胶原纤维(Collagen Fiber)是结缔组织中分布最广含量最多的一种纤维，广泛分布于各种脏器，其中Ⅰ型胶原纤维主要是骨、皮肤、肌腱；Ⅱ型胶原纤维主要是软骨胶原；Ⅲ型胶原纤维主要在胚胎组织、成人血管、胃肠道；Ⅳ型胶原纤维主要在基膜中。 天狼星红与其衬染液都是强酸性染料，易与胶原分子中的碱性基团结合，吸附牢固。偏振光镜检查，胶原纤维有正的单轴双折射光的属性，与天狼星红复合染色液结合后，可增强双折射，提高分辨率，从而区分两型胶原纤维。

染色步骤：

        （1）脱蜡至水：二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，二甲苯Ⅲ5分钟，无水乙醇1分钟，95%乙醇1分钟，75%乙醇1分钟，蒸馏水洗5分钟。

        （2）滴加铁苏木素染色液5-10分钟，蒸馏水洗10-20秒洗去多余染色液。

        （3）自来水洗5分钟。

        （4）天狼星红染色液滴染15-30分钟。

        （5）流水稍微冲洗，去除切片表面染液。

        （6）脱水透明：75%乙醇1分钟，95%乙醇1分钟，无水乙醇1分钟，二甲苯3次，每次1-2分钟，中性树胶封固。

染色结果：

           1）光学显微镜观察结果：胶原纤维呈红色，细胞核呈棕褐色到黑色，肌纤维呈黄色。

           2）偏振光镜观察结果：Ⅰ型胶原纤维呈强橙黄色或亮红色，Ⅲ型胶原纤维呈绿色。