改良番红O-固绿软骨染色

改良番红O固绿软骨染色：    

       软骨组织由软骨细胞、软骨基质和纤维组成，软骨组织及其周围的软骨膜构成软骨。软骨根据基质内所含纤维素成分不同分为透明软骨、弹性软骨、纤维软骨。

       改良番红 O-固绿软骨染色法的染色原理在于嗜碱性的软骨与碱性染料番红 O结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成绿色或蓝色，与呈现红色的软骨对比鲜明，从而将软骨组织和骨组织区分开。番红 O着色与阴离子的浓度近似成正比关系，间接反映了基质中蛋白多糖的含量和分布。当软骨受到损伤时，软骨中的糖蛋白会释放出来，使基质成分分布不均匀，从而导致番红 O淡染或不着色。通过图像分析软件可对番红 O染色的软骨基质进行定量分析。同固绿与胶原纤维结合，不易褪色。番红 O-固绿染色的分化很关键，分化过度易导致切片不着色，分化不足易导致切片着色过深。

染色步骤：

   （1）脱蜡至水：二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，二甲苯Ⅲ5分钟，无水乙醇1分钟，95%乙醇1分钟，75%乙醇1分钟，蒸馏水洗5分钟。

   （2）滴加铁苏木素染色液3~5分钟，蒸馏水洗10-20秒洗去多余染色液。

   （3）酸性分化液分化15秒。流水冲洗5分钟。

   （4）滴加固绿染色液5分钟。

   （5）快速用弱酸溶液洗涤切片10~15秒，以便去除残留的固绿，晾干。

   （6）入番红染色液内浸染5分钟。

   （7）95%乙醇3秒--无水乙醇3秒--无水乙醇1分钟--二甲苯1分钟--二甲苯1分钟--二甲苯1分钟

   （8）光学树脂封固

染色结果：