TUNEL染色荧光法

TUNEL检测原理：

       细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测，可以发现180-200bp的DNA  ladder。基因组DN A断裂时，暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl TransferaseTT)的催化下加上绿色荧光探针荧光素(FITC)标记的dUTP(fluorescein-dUTP)，从而可以通过荧光显微镜或流式细胞仪进行检测，这就是TUNEL(T dT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。

TUNEL染色步骤：

（1）脱蜡至水：二甲苯Ⅰ5分钟，二甲苯Ⅱ5分钟，二甲苯Ⅲ5分钟，无水乙醇1分钟，95%乙醇1分钟，75%乙醇1分钟，蒸馏水洗涤2分钟

（2）滴加20μg/ml蛋白酶K 37°C恒温15~30分钟，PBS洗3次/5分钟。注意：蛋白酶K要洗涤干净 

（3）滴加TUNEL检测液37°C恒温箱避光孵育60分钟，PBS洗3次/5分钟

（4）滴加DAPI工作液10分钟，流水冲洗5分钟

（5）脱水、透明：75%乙醇1分钟—95%乙醇1分钟—无水乙醇1分钟—二甲苯1分钟—二甲苯1分钟—二甲苯1分钟—抗荧光淬灭封片胶封片