结缔组织常用的染色方法及其应用

结缔组织

结缔组织含有3种纤维，即胶原纤维、网状纤维和弹力纤维。这3种纤维广泛分布于人体和动物身体各处，具有营养、支持、防御保护和创伤修复等功能。这3种纤维在HE染色时不宜区分，可通过特染加以鉴别。

(一)胶原纤维

胶原纤维主要是由成纤维细胞产生的一种胶原蛋白绞链而成，是结缔组织3种纤维中含量最多、分布最广的一种纤维，在皮肤、巩膜和肌腱中尤为丰富。胶原纤维分子中含有碱性氨基酸，能够与酸性染料进行结合反应。

Masson 三色染色法

1、染色步骤

①脱蜡至水：二甲苯Ⅰ5min，二甲苯Ⅱ5min，二甲苯Ⅲ5min，无水乙醇1min，95%乙醇1min，75%乙醇1min，自来水冲洗数秒；

②用配置好的Weigert铁苏木素染色液染色8分钟；

③酸性乙醇分化液分化15秒，水洗；

④Masson蓝化液返蓝5分钟，水洗。蒸馏水洗1分钟；

⑤丽春红品红染色液染色5分钟；

⑥弱酸工作液洗1分钟；

⑦磷钼酸溶液洗1分钟，弱酸工作液洗1分钟；

⑧苯胺蓝染色液染2分钟，弱酸洗1分钟；

⑨脱水透明：95%乙醇快速脱水2-3秒，无水乙醇脱水3次，每次5-10秒，二甲苯透明3次，每次1-2分钟，中性树胶封固；

2、结果：胶原纤维、黏液、软骨呈蓝色(如亮绿液染色为绿色)，胞质、肌肉、纤维素、神经胶质呈红色，胞核黑蓝色。

3、注意事项

(1)丽春红酸性品红液经磷钼酸分化时须在显微镜下控制至肌纤维清晰为止。

(2)用亮绿代替苯胺蓝染料，胶原纤维被染成绿色。

(3)用Weigert铁苏木色精染细胞核，着色深不易褪色。

4、应用 胶原纤维染色主要用于帮助判断梭形细胞肿瘤的来源，如是否为纤维性肿瘤，也可用于显示组织或器官的损伤、修复与纤维化情况，如早期肝硬化、心肌瘢痕灶等纤维组织增加或减少性病变。

(二)网状纤维

网状纤维是结缔组织内的一种交错排列的纤细纤维，交织堆集呈致密网状，故得名。网状纤维是构成组织的网状支架，在HE染色时不易被辨别，银氨溶液浸染能使其变成黑色，故该纤维又称为嗜银纤维。染色的基本原理为网状纤维表面的糖蛋白与银化合物结合，再经过甲醛还原成为金属银沉淀于纤维内。网状纤维染色可显示网状纤维及基底膜物质，其中网状纤维主要由Ⅲ型胶原纤维组成，在机体结缔组织中广泛存在；基底膜主要由Ⅳ型胶原及层粘连蛋白组成。

Gomori 银染色法

1、染色步骤

(1)石蜡切片常规脱蜡至水。

(2)高锰酸钾液氧化5min,自来水洗1min。

(3)草酸液漂白2min，水洗2min

(4)硫酸铁铵液媒染5min，水洗1min，蒸馏水洗2次。

(5)Gomori银氨液3min，蒸馏水洗2次。

(6)10%甲醛液还原5min，蒸馏水浸洗2次。

(7)常规乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2、结果：网状纤维呈黑色，核灰色，其他组织呈对比染色的颜色

3、注意事项

(1)配制银氨液所需器皿要洗干净，所用的蒸馏水要纯。

(2)配制银氨液时加氨水要适量，不能过多，也不能过少。配好后的银氨液遇光或受空气作用后易解离析出银盐，故需密封避光保存。银氨液一般宜新鲜配制，置于4℃冰箱中可保存数天。

(3)避免染色时间过长出现银颗粒沉淀。

4、应用 网状纤维染色在肿瘤病理诊断中具有鉴别诊断作用：①区分癌与肉瘤，网状纤维包绕癌巢周围，而不存在于巢内癌细胞间；大多数肉瘤则在单个瘤细胞间可见较丰富的网状纤维；②区分某些间叶组织肿瘤：如在典型的纤维肉瘤中，具有丰富的网状纤维且分隔包绕单个瘤细胞；典型的恶性外周神经鞘膜瘤中，网状纤维则与梭形细胞平行分布，并不包绕瘤细胞。除应用于肿瘤性病变，网状纤维染色还可以帮助观察肝组织病变处的网状支架塌陷、破坏或增生等改变。

(三)弹力纤维

弹力纤维广泛分布于身体各处，特别在肺泡、动脉壁、支气管及皮肤等处最为丰富。其主要成分为含有丰富二硫键(R-S-S-R)的糖蛋白，故又称为弹力蛋白。

醛品红染色法

1、染色步骤

(1)石蜡切片常规脱蜡至水

(2)Lugol碘处理5min,稍水洗

(3)5%硫代硫酸钠水溶液处理5min，流水冲洗5min

(4)70%乙醇稍洗。

(5)醛品红染10min。

(6)70%乙醇浸洗2次，每次约30s，至切片不再脱色为止，稍水洗。

(7)橙黄G染液染约Is，稍水洗。

(8)常规乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。

2、结果 弹力纤维深紫色，黏液紫色(肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、垂体B细胞均能同时着色)，背景呈不同程度的黄色。

3、注意事项

(1)醛品红溶液置4℃冰箱内保存，可保存6个月，使用时需恢复至室温，若保存时间过长，则染色时间亦要加长。

(2)橙黄G溶液要淡染，以避免掩盖弹力纤维的颜色。

4、应用 弹力纤维染色常用于观察病变中弹力纤维是否增生或破坏，如肺气肿等的弹力纤维断裂、变性或萎缩；高血压病的小动脉管壁弹力纤维异常增生；动脉粥样硬化症时动脉管壁弹力纤维的崩解、断裂与缺失；皮肤组织病变中弹力纤维增生、卷曲、变性、崩解等变化，以及各种实验动物组织中的血管壁损害和增生等情况。此外，弹力纤维染色对弹力纤维瘤的诊断有决定作用。