脱钙

一、脱钙步骤

1.取材：骨组织固定于10%甲醛溶液24h后再锯取厚度约0.5cm骨片。

2.固定：再以10%甲醛溶液固定2d。

3.脱钙：将组织置于脱钙剂中，每日更换新鲜液、直至组织软化为止。

4.冲洗：流水冲洗24h(除酸）。

5.其它：进行常规脱水，透明，浸蜡，切片。

二、判断完全脱钙

1.针刺

如果很容易被刺透而且不感到阻力时，说明组织基本上脱钙完全，否则应继续脱钙。靠组织的柔软性测验脱钙作用靠不住，而且这种插入一根针以察觉钙沉淀的方法会造成组织损伤。

2. 化学实验检查

取5mL脱钙液用2mol/L的NaOH(氢氧化钠）调整至中性，再加5%草酸钠或草酸铵1mL,液体浑浊表示有钙质。迟至5min仍不浑浊表示脱钙液中不含有钙质。组织中仍有钙质时，一定量的钙离子会溶于脱钙液中，游离的钙会干扰脱钙作用完成。显然，应在每次试验时完全更换，再试验中必须经过2-3h间隔让钙溶解。

三、注意事项

1.骨组织固定24h后，锯下不超过0.5mm厚度的薄骨片，再以10%甲醛溶液固定后进行脱钙。（未固定的组织在酸性脱钙液中受到损伤比已固定的组织大3倍）。骨组织过厚则需延长脱钙时间，长时间浸于强酸影响切片染色效果。

2.在不影响诊断条件下，应将骨组织周围的软组织全部剥去。如果切片目的在于观察骨髓病变或骨组织肿瘤，最好除去一部分正常的致密的骨组织，以利于脱钙和制片。

3.脱钙前最好先将骨组织进行脱脂。

4.脱钙要彻底，脱水应充分，在脱水过程中，要注意不使其过度硬化。